關于Elisa試劑盒測抗原的競爭方法介紹

　　當抗原材料中的干擾物質不易除去，或不易得到足夠的純化抗原時，可用此法檢測特異性抗體。其原理為標本中的抗體和一定量的酶標抗體競爭與固相抗原結合。標本中抗體量越多，結合在固相上的酶標抗體愈少，因此陽性反應呈色淺于陰性反應。如抗原為高純度的，可直接包被固相。如抗原中會有干擾物質，直接包被不易成功，可采用捕獲包被法，即先包被與固相抗原相應的抗體，然后加入抗原，形成固相抗原。洗滌除去抗原中的雜質，然后再加標本和酶標抗體進行競爭結合反應。競爭法測抗體有多種模式，可將標本和酶標抗體與固相抗原競爭結合，抗HBcELISA一般采用此法。另一種模式為將標本與抗原一起加入到固相抗體中進行競爭結合，洗滌后再加入酶標抗體，與結合在固相上的抗原反應。抗HBe的檢測一般采用此法。

　　Elisa試劑盒的實驗步驟：

　　1.以稀釋液將待檢標本做適當稀釋（預試中確定）加入包被有已知抗原的酶標板中（50ul/孔），加封口膠帶于37℃作用30min。

　　2.棄反應液，以沖洗液連續洗板5次并于吸水紙上拍干。

　　3.加入酶標抗體（濃度在預試中確定）。加封口膠帶后于37℃作用30min。

　　4.重復第2步。

　　5.加底物（濃度在預試中確定），加封口膠帶后于室溫下避光作用5-60min，其間不時觀察，顯色滿意后加終止液50ul/孔。

　　6.于酶標儀測定OD值，OPD用492nm測定，TMB用450nm測定。